Để tạo một plasmit ADN tái kết hợp, kỹ thuật được tiến hành theo các bước:
phân lập ADN mang gen mong muốn gắn ADN mang gen vào ADN của plasmit.
phân lập ADN mang gen mong muốn cắt ADN được phân lập và mở plasmit bởi cùng một enzim dùng enzim gắn đoạn ADN mang gen vào ADN plasmit đóng vòng ADN plasmit.
phân lập ADN mang gen mong muốn cắt ADN vòng của plasmit gắn đoạn ADN mang gen vào ADN plasmit bằng enzim gắn sau đó đóng vòng ADN plasmit.
phân lập ADN mang gen mong muốn đưa đoạn ADN này vào tế bào chất của vi khuẩn dùng enzim gắn đoạn ADN này với ADN của vi khuẩn.
phân lập ADN mang gen mong muốn cắí ADN được phân lập và mở plasmit bởi cùng một enzim dùng enzim gắn đoạn ADN mang gen vào ADN plasmit đóng vòng ADN plasmit.